太空三維（3D）生物打印技術(shù)有助于構(gòu)建精確的仿生腫瘤模型，可用于評(píng)估空間環(huán)境對(duì)腫瘤的復(fù)合效應(yīng)，從而深入了解疾病的原理和潛在的治療方法。目前太空3D生物打印面臨一些困難，如發(fā)射前的不確定性、液體可能泄漏、太空中如何長期培養(yǎng)、設(shè)備自動(dòng)控制、數(shù)據(jù)采集和傳輸?shù)取?/p>

近日，來自清華大學(xué)的熊卓、張婷和方永聰教授團(tuán)隊(duì)進(jìn)行了基于衛(wèi)星在軌打印3D腫瘤模型的相關(guān)研究。該研究開發(fā)了一種結(jié)構(gòu)強(qiáng)度高、體積小（220mm×250mm×150mm）、重量輕（< 6 kg）的新型太空3D生物打印設(shè)備（圖1）。基于微凝膠的雙相熱敏（MBT）生物墨水和懸浮介質(zhì)，具有優(yōu)異的存儲(chǔ)性能和抗泄漏性，可適應(yīng)潛在的發(fā)射延遲和振動(dòng)，從而支持復(fù)雜腫瘤模型的在軌打印和原位培養(yǎng)。此外，該研究還開發(fā)了一種智能控制算法，能夠自動(dòng)控制3D打印、自動(dòng)對(duì)焦、熒光成像和數(shù)據(jù)地面?zhèn)鬏敗Ｔ撗芯繛槭状瓮ㄟ^衛(wèi)星在太空中實(shí)現(xiàn)腫瘤模型在軌打印，其形態(tài)穩(wěn)定，存活率適中。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，3D腫瘤模型在太空中比在地球上對(duì)抗腫瘤藥物更敏感。該研究為太空3D生物打印開辟一條新途徑，為未來太空生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)研究提供新的可能性。研究成果以“Satellite-Based On-Orbit Printing of 3D Tumor Models”為題發(fā)表在Advanced Materials期刊上。

圖1 太空3D生物打印實(shí)驗(yàn)流程及機(jī)制示意圖
太空生物打印裝置主要由3D打印模塊、生物模組、顯微鏡模塊和控制模塊組成（圖2A）。3D打印模塊主要由兩個(gè)裝滿生物墨水的注射器和一個(gè)與加熱片相連的硅絕緣體組成。生物模塊由兩個(gè)大室（體積為1.2 ± 0.2 mL）和八個(gè)小室（體積為0.4 ± 0.1 mL）組成，大室中裝有用于嵌入打印的懸浮培養(yǎng)基，小室中裝有用于研究空間腫瘤模型藥物反應(yīng)的癌癥組裝體和培養(yǎng)基。生物模塊安裝在可加熱的上下平臺(tái)上，而打印模塊則安裝在XY運(yùn)動(dòng)平臺(tái)上，旁邊是一個(gè)由電機(jī)控制的注射器活塞，用于將含有細(xì)胞的生物墨水?dāng)D壓成復(fù)雜的3D結(jié)構(gòu)。生物模塊與3D打印模塊相連，并通過乳膠軟膜密封（圖2D），軟膜的厚度經(jīng)過進(jìn)一步優(yōu)化。此外，科研人員在打印模塊和生物模塊的外壁安裝了溫度傳感器，以監(jiān)測不同模塊溫度變化。在整個(gè)在軌打印和培養(yǎng)過程中，打印模塊和生物模塊的外部溫度分別保持在21 ± 2°C和32 ± 2°C。因此，打印過程中MBT生物墨水和懸浮介質(zhì)的實(shí)際溫度分別保持在32 ± 2℃和35 ± 2℃。在地球上的反復(fù)測試表明，內(nèi)部和外部組件之間的溫差是恒定的。衛(wèi)星進(jìn)入軌道后，打印模塊和生物模塊在控制模塊的驅(qū)動(dòng)下加熱到設(shè)定溫度，然后該設(shè)備通過3D打印模塊對(duì)腫瘤模型進(jìn)行在軌3D打印（圖2E）。打印完成后，顯微鏡模塊自動(dòng)捕捉生物樣本的明視野和熒光圖像，并將其傳輸?shù)叫l(wèi)星，然后再傳輸?shù)降孛妫▓D2F）。在火箭發(fā)射過程中設(shè)備可能會(huì)經(jīng)歷劇烈振動(dòng)，持續(xù)時(shí)間約為一分鐘，因此需要高強(qiáng)度和剛度。科研人員對(duì)設(shè)備的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)進(jìn)行了優(yōu)化，確保有效載荷裝置既堅(jiān)固又輕巧。

圖2 用于在軌實(shí)驗(yàn)的太空3D生物打印設(shè)備

考慮到在衛(wèi)星中無人操作和傳統(tǒng)擠壓式3D生物打印的固有局限性，原位培養(yǎng)過程通常很難進(jìn)行灌注。主要因?yàn)樵谝后w灌注過程中，氣液界面容易產(chǎn)生大量氣泡。因此，科研人員開發(fā)了一種嵌入式3D生物打印策略，利用一種懸浮培養(yǎng)基既能3D打印MBT生物墨水，又能原位培養(yǎng)打印出的腫瘤模型（圖3A）。MBT懸浮培養(yǎng)基由分散相GelMA凝膠和連續(xù)相明膠及透明質(zhì)酸（HA）復(fù)合材料組成。結(jié)果表明，MBT懸浮培養(yǎng)基可用于高保真打印復(fù)雜結(jié)構(gòu)（圖3B）。熒光成像顯示，MBT懸浮介質(zhì)主要由類似于MBT生物墨水的微凝膠組成。流變測試表明，MBT懸浮介質(zhì)具有剪切稀化和自愈合特性（圖3C），有利于嵌入式打印。對(duì)嵌入打印的螺旋結(jié)構(gòu)進(jìn)行定量測量表明，絲的寬度和間距受打印溫度影響不大（圖3D、E），表明MBT懸浮介質(zhì)具有較寬的打印溫度范圍。雖然微顆粒大大降低MBT懸浮介質(zhì)的不透明度，但嵌入打印結(jié)構(gòu)的輪廓仍清晰可見。研究人員還打印了人體解剖結(jié)構(gòu)（如人的支氣管和心臟，圖3F）和帶有懸臂的結(jié)構(gòu)（如垂直的TH管，圖3G），用于展示打印能力。使用傳統(tǒng)的擠壓打印方法很難打印出具有懸臂和薄壁等復(fù)雜結(jié)構(gòu)的構(gòu)造物。由于明膠的存在，MBT懸浮介質(zhì)在加熱階段的凝膠-溶膠轉(zhuǎn)變點(diǎn)為35°C，在冷卻階段的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變點(diǎn)為20°C。將MBT懸浮培養(yǎng)基注入生物模塊后，在4℃下迅速凝固。凝膠化后，MBT懸浮介質(zhì)即使倒置也不會(huì)在容器內(nèi)流動(dòng)。采取這種預(yù)防措施是為了防止MBT懸浮介質(zhì)在半開放艙內(nèi)泄漏，在火箭發(fā)射過程中的劇烈振動(dòng)可能會(huì)導(dǎo)致這種泄漏發(fā)生。在37℃的MBT懸浮培養(yǎng)基中培養(yǎng)的打印構(gòu)建體在72 h內(nèi)保持較高的細(xì)胞活力。以上結(jié)果表明，MBT懸浮培養(yǎng)基可支持復(fù)雜構(gòu)建物在30 ~ 37°C下嵌入打印和原位培養(yǎng)，同時(shí)在4 ~ 25°C下經(jīng)受長途運(yùn)輸而不會(huì)發(fā)生泄漏。

圖3 MBT懸浮介質(zhì)的設(shè)計(jì)和表征

接著，科研人員研究了太空環(huán)境中肺癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的反應(yīng)。有報(bào)道稱微重力可調(diào)節(jié)化療藥物的作用，但這些研究都是在二維培養(yǎng)條件下使用微重力模擬裝置進(jìn)行的，因此得出的結(jié)論并不完全可靠。該研究設(shè)計(jì)了一個(gè)生物模塊，其中有一個(gè)裝有順鉑敏感和順鉑抗性H460/CAF癌細(xì)胞組裝體的8孔室。該癌細(xì)胞組裝體是評(píng)估藥物抗腫瘤能力的最佳3D腫瘤模型。敏感組和耐藥組都接受不同劑量的順鉑治療。通過液滴微流控技術(shù)，使用GFP標(biāo)記的H460癌細(xì)胞和Dil標(biāo)記的CAF生成直徑200 μm的癌細(xì)胞組裝體。為增強(qiáng)聚焦效果，將癌細(xì)胞組裝體嵌入薄層GelMA水凝膠中，然后進(jìn)行光交聯(lián)，使其附著在培養(yǎng)室底部。熒光染色（圖4C）和組織學(xué)染色（圖4D、4E）顯示，培養(yǎng)一周的癌細(xì)胞組裝體發(fā)育成腫瘤組織樣結(jié)構(gòu)，腫瘤實(shí)質(zhì)和基質(zhì)成分圍繞著實(shí)質(zhì)癌細(xì)胞，與體內(nèi)腫瘤組織相似。為研究太空環(huán)境對(duì)腫瘤對(duì)藥物治療反應(yīng)的影響，在地面和太空同時(shí)捕獲明視野和熒光圖像。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，順鉑耐藥組和順鉑敏感組在空間環(huán)境給藥36 h后都出現(xiàn)明顯反應(yīng)。在太空中比在地球上更加迅速和敏感（圖4F）。太空環(huán)境中的耐藥組比藥物敏感組對(duì)順鉑的耐藥性更強(qiáng)（圖4G ~4J）。研究結(jié)果表明，空間微重力環(huán)境可能會(huì)大大提高細(xì)胞對(duì)化療藥物的反應(yīng)性，從而使耐藥細(xì)胞更容易進(jìn)行抗腫瘤治療。這一發(fā)現(xiàn)為解決腫瘤耐藥性問題提供一種新方法。要確定空間輻射和微重力對(duì)腫瘤治療敏感性的不同影響，還需要進(jìn)一步的研究。研究人員計(jì)劃不久將來在中國空間站上進(jìn)行全面的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

圖4 太空環(huán)境影響癌細(xì)胞對(duì)順鉑的反應(yīng)

綜上所述，該研究開發(fā)了一種新型適用于太空的生物打印設(shè)備，可以在太空中打印和培養(yǎng)3D腫瘤模型。研究結(jié)果表明，所開發(fā)的MBT生物墨水和MBT懸浮培養(yǎng)基能夠在很寬的溫度范圍內(nèi)打印3D腫瘤模型，并能在軌道上實(shí)現(xiàn)形態(tài)穩(wěn)定、細(xì)胞活力適中的培養(yǎng)。本文在衛(wèi)星上對(duì)多功能實(shí)驗(yàn)裝置和太空生物打印技術(shù)成功進(jìn)行了在軌驗(yàn)證，標(biāo)志著太空3D生物打印技術(shù)的發(fā)展邁出重要一步，為加速太空生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究與發(fā)展提供新的機(jī)遇。

審核編輯：黃飛