無菌操作及愈傷組織誘導技術

實驗準備：
煙草無菌試管苗培養：將煙草種子用消毒液84＃消毒后，無菌水洗3次，無菌吸水紙吸干水分，接種在MS培養基上。種子苗具4-5葉時繼代擴繁90盒，保證每學生1盒。
無菌培養皿每學生2套。
實驗課開始前30min. 將實驗用具、培養基及無菌煙草苗同時用酒精用75%酒精擦洗后置于超凈工作臺，打開超凈工作臺風機和紫外燈。

2.1 實驗目的
掌握無菌操作技術；基本掌握植物愈傷組織誘導培養技術和調控條件。

2.2實驗材料及設備
外植體材料：煙草無菌苗葉片；實驗1配制的培養基。
設備及工具：超凈工作臺；不銹鋼鑷子、剪刀、解剖刀、酒精燈等；75%酒精。

2.3 操作方法
A. 在自來水管下將手洗凈，然后用75%酒精將手消毒，再進入超凈工作臺開始接種操作。
B. 點燃酒精燈，將鑷子、解剖刀在酒精燈下烤干。
C. 取一無菌培養皿，然后用解剖刀切取1-2片無菌苗葉片置于無菌培養皿中，并用鋒利解剖刀將葉片切成2mm2左右的小片，然后將其接種于準備好的培養基上，一般每瓶接種4-5小片。
D. 快速封好瓶口，用記號筆寫上姓名和接種日期。
E. 接種后的三角瓶置于24℃，條件下黑暗培養一周，然后在同樣溫度下有光照和全黑暗下培養直至愈傷組織形成。
注意外植體切割時，動作要快，否則會造成失水而影響生長。為防止操作時失水也可在培養皿中滴幾滴無菌水，然后將無菌苗置于其中進行切割。

2.4 記載內容
培養基凝固狀況；實驗操作過程；葉片生長狀況、接種外植體大小；每瓶接種數、接種總瓶數。