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摘要：胰島素樣生長因子21受體(IGF21R)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與各種正常生理活動及多種疾病發(fā)生密切相關(guān)。將IGF21R來源的未磷酸化多肽序列LYASVNPEY固定于表面等離子體共振(SPR)生物傳感器專用的CM5芯片表面,以含有相應(yīng)蛋白激酶的細(xì)胞裂解液進行處理,利用SPR生物傳感器和抗酪氨酸磷酸化抗體PY20進行酪氨酸磷酸化水平檢測。結(jié)果表明:PY20能靈敏地檢測多肽酪氨酸磷酸化水平變化,即能夠區(qū)分不同孵育時間以及不同成分的細(xì)胞裂解液所引起的多肽酪氨酸磷酸化水平差異;研究了IGF21R來源多肽的酪氨酸磷酸化對多肽2蛋白間相互作用的影響,證實了只存在磷酸化的多肽與其下游的胰島素受體底物(IRS21)相互作用,測定了此磷酸化的多肽與IRS21的親和常數(shù)(KA)為(2.02?0.09)@108Lmol-1、結(jié)合速率常數(shù)(ka)為(2.30?0.15)@106Lmol-1s-1以及解離速率常數(shù)(kd)為(1.14?0.13)@10-2s-1。這種新型的模擬受體的多肽酪氨酸磷酸化研究方法可用于受體磷酸化信號通路的研究以及基于這些信號通路的藥物篩選研究。
關(guān)鍵詞：表面等離子體共振,生物傳感器,胰島素樣生長因子21受體激酶,酪氨酸磷酸化,親和力
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