教學目的與要求：
在進一步認識原生質膜性質的基礎上，深入了解細胞融合的基本原理，掌握電融合和
PEG融合的基本方法。
第一節(jié)、體細胞雜交的概念
體細胞雜交，即原生質體融合。
植物細胞雜交的幾個重要進展
1960年，Kocking用酶法制備高等植物原生質體首次獲得成功；
1970年，Power首次用硝酸鈉進行為誘導劑進行了較大規(guī)模的原生質體誘導融合；
1971年，Takebe首次從離體煙草原生質體培養(yǎng)中獲得再生完整植株；
1972年，Carlson首次獲得粉藍煙草和郎氏煙草的細胞雜種，這也是第一個植物細胞雜種；
1974年，Kao將聚乙二醇誘導融合法應用于植物細胞融合并建立了相應的融合技術；
1978年，Melchers獲得了第一個屬間細胞雜種（番茄＋馬鈴薯）；
1981年，Zimmerman發(fā)明了電融合儀，并首次提出了電融合概念；
1987年，Schweiger建立了單對原生質體電融合技術程序。
根據(jù)融合時細胞的完整程度，原生質體融合可分為兩大類：
? 對稱融合（asymmetric fusion）－即兩個完整的細胞原生質體融合。
? 非對稱融合（symmetric fusion）－利用物理或化學方法使某親本的核或細胞質失活后再
進行融合，它可以分為幾種：
用于細胞核或細胞質失活的方法分為物理和化學兩大類：
? 物理方法常采用射線處理，如X射線、射線等，它們能使細胞核失活；
? 化學處理目前常用的試劑有，核失活－碘乙酰胺（IOA）、碘乙酸(Iodoacetate)；質失活
－羅丹明（R－6－G，它是一種親脂染料，能夠抑制線粒體的氧化磷酸化過程而達到失
活作用。
第二節(jié)、原生質體的融合
一、融合方法
1．PEG誘導融合法
? PEG誘導融合的特點：其優(yōu)點是融合成本低，勿需特殊設備；融合子產(chǎn)生的異核率較
高；融合過程不受物種限制。其缺點是融合過程繁瑣，PEG可能對細胞有毒害。
? PEG的作用機理： Kao等認為，由于PEG分子具有輕微的負極性，故可以與具有正極
性基團的水、蛋白質和碳水化合物等形成H鍵，從而在在原生質體之間形成分子橋，其結果是使原生質體發(fā)生粘連進而促使原生質體的融合；另外，PEG能增加類脂膜的流動
性，也使原生質體的核、細胞器發(fā)生融合成為可能。
? 融合技術要點：